細(xì) 胞 基 本 信 息

▲SK-LU-1細(xì)胞正常生長形態(tài)照片

--細(xì) 胞 基 本 信 息---

細(xì)胞名稱:  SK-LU-1(人低分化肺腺癌細(xì)胞)

細(xì)胞別稱:   SK-Lu-1; SK LU 1; SK-Lu1; SK-LU1; SKLU-1; SKLU1; SKLU01

細(xì)胞貨號:   SNL-229

生長特性:   貼壁

培養(yǎng)條件:   DMEM+10% FBS+1% P/S

培養(yǎng)環(huán)境:  空氣，95%；二氧化碳 (CO2)，5%

細(xì)胞簡介:  SK-LU-1細(xì)胞來源于一名64歲患有肺腺癌（III級）的白人女性。SK-LU-1細(xì)胞在免疫耐受大鼠中是致瘤的。SK-LU-1細(xì)胞支原體污染于1971年被發(fā)現(xiàn)并消除，可以用于3D細(xì)胞培養(yǎng)。

細(xì) 胞 凍 存 攻 略

凍存步驟:

1、先將細(xì)胞按傳代步驟消化、離心，至傳代步驟4，棄細(xì)胞上清，獲得細(xì)胞沉淀；

2、加入適量預(yù)先配好的程序性凍存液輕輕重懸細(xì)胞，并將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至做好標(biāo)記的凍存管中；

3、將凍存管放入程序性凍存盒，放入-80℃冰箱過夜；

4、轉(zhuǎn)移細(xì)胞至液氮保存并登記細(xì)胞保存位置，液氮保存24h后建議復(fù)蘇一管檢測凍存細(xì)胞的活性，若活性合格即可長期保存，若低于80%建議重新凍存；

Tips：

◎1. 檢測凍存細(xì)胞活性結(jié)果未合格前，培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)胞建議繼續(xù)培養(yǎng)直至確認(rèn)凍存合格方可視需要丟棄；

◎2. 程序性凍存液需要配合程序性凍存盒使用，若使用非程序凍存液可以按產(chǎn)品說明書處理降溫過程；

◎3. T25培養(yǎng)瓶長滿通?？梢詢龃?-3管，10cm皿長滿可以凍存3-4管；

細(xì) 胞 復(fù) 蘇 攻 略

復(fù)蘇步驟:

1、將所需的培養(yǎng)基放在培養(yǎng)箱預(yù)熱30min后開始復(fù)蘇；

2、準(zhǔn)備37度溫水，將細(xì)胞從液氮罐取中出，觀察管內(nèi)無液氮的情況下，捏住管蓋，將細(xì)胞凍存部分浸入溫水輕輕搖晃，融化至米粒大小冰塊，終止水浴；

3、將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心1-2min，不同離心機(jī)具體轉(zhuǎn)速會有差異；

4、離心完成后，棄凍存液，用剛才預(yù)熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管，并輕柔重懸細(xì)胞后接種至T25或者10cm皿中。

Tips：

◎1. 凍存管在液氮長期保存過程中難免滲入液氮，取出細(xì)胞時震動不要過大，水浴前一定要觀察管內(nèi)是否存在液氮，若有液氮建議靜置一會待液氮蒸發(fā)后再水??；

◎2. 水浴時可以使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，以降低管蓋縫隙滲入水導(dǎo)致污染的概率；

◎3. 水浴至剩米粒大小時及時終止水浴，避免過度水浴或水浴時間不足；

◎4. 建議水浴完成后直接在離心管內(nèi)離心細(xì)胞，避免再次轉(zhuǎn)移細(xì)胞；

◎5. 復(fù)蘇后的細(xì)胞比較脆弱，吹打和轉(zhuǎn)移細(xì)胞時盡量輕柔，復(fù)蘇24h后換液去除死亡細(xì)胞；

#常見問題及解決方案

一、細(xì)胞密度怎么計算的？

嚴(yán)格意義上，細(xì)胞密度需要收集細(xì)胞懸液計數(shù)細(xì)胞數(shù)量，但在實際培養(yǎng)過程中，并不需要為了精確控制細(xì)胞數(shù)量而消化細(xì)胞計數(shù)。因此，常用的細(xì)胞密度指細(xì)胞相對于最大生長密度的比值，貼壁細(xì)胞可以粗略的用細(xì)胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示，即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部，有細(xì)胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值，當(dāng)然這種表達(dá)方式受限于單個細(xì)胞生長不同密度時所占面積不同導(dǎo)致并不嚴(yán)謹(jǐn)，但也是相對直觀、簡便的表現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)的一種方式；

二、培養(yǎng)過程中細(xì)胞碎片較多怎么處理？

1. 細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡及細(xì)胞器折光，這個屬于細(xì)胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細(xì)胞都會有這種現(xiàn)象，只是不同細(xì)胞顆粒多少有區(qū)別，細(xì)胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。

2. 細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片和細(xì)胞代謝產(chǎn)物，可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細(xì)胞密度70-80%左右消化處理細(xì)胞，消化完成后加培養(yǎng)基終止消化，混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞，再離心后，用培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

三、細(xì)胞具體消化時間是多久？

每個客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，不能規(guī)定消化時間，以實際消化效果和客戶經(jīng)驗為準(zhǔn)。

文 獻(xiàn) 引 用

Title:        

USP5-Beclin 1 axis overrides p53-dependent senescence and drives Kras-induced tumorigenicity

Journal:   Nature Communications

Date:      2022/12/23

Product name：  SK-LU-1(人低分化肺腺癌細(xì)胞)

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