非洲綠猴腎細(xì)胞是從正常成年非洲綠猴的腎臟組織中分離建立的。該細(xì)胞常作為轉(zhuǎn)染宿主，用于支原體的檢測(cè)。細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至狀態(tài)良好后灌滿培養(yǎng)基運(yùn)輸，獲得細(xì)胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超凈臺(tái)中操作；如細(xì)胞生長(zhǎng)至70%-80%，將瓶中的培養(yǎng)基移入無菌瓶中留作培養(yǎng)使用，保留5-8mL培養(yǎng)基在37℃、5%的CO2的溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)至90%-100%后，按要求消化傳代；棄去培養(yǎng)基，用無菌PBS或者其他緩沖液清洗細(xì)胞2次，加入適量胰蛋白酶消化（EDTA胰酶），待細(xì)胞*脫壁后加培養(yǎng)基吹打混勻，分瓶培養(yǎng)。

　　非洲綠猴腎細(xì)胞Vero可能作為表達(dá)外源蛋白質(zhì)的有用細(xì)胞。作為一種連續(xù)傳代的靈長(zhǎng)類細(xì)胞，Vero細(xì)胞的糖基化酶可能與人類的相似。Vero細(xì)胞可以大規(guī)模培養(yǎng)，已經(jīng)用于脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗的生產(chǎn)。研究了不同條件下Vero細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，包括脂質(zhì)體和DNA的濃度，細(xì)胞數(shù)量以及細(xì)胞暴露于脂質(zhì)體-DNA混合物中的時(shí)間。通過檢測(cè)報(bào)告基因β-gal確定轉(zhuǎn)染效率，優(yōu)化不同轉(zhuǎn)染參數(shù)，提高了Vero細(xì)胞脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的效率和表達(dá)水平。

　　非洲綠猴腎細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞傳染的步驟：

　　（1）在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，以2.5~7.5×10°細(xì)胞/孔接種細(xì)胞于0.5ml適當(dāng)*培養(yǎng)基中。

　?。?）37℃過夜培養(yǎng)細(xì)胞，直到細(xì)胞生長(zhǎng)至50~80%匯和。

　　（3）在滅菌的Eppendorf管中準(zhǔn)備下列溶液

　　溶液A：用25u1無血清培養(yǎng)基稀釋0.25～0.5ug pCDNA3LacZ。

　　溶液B：用25ul無血清培養(yǎng)基稀釋0.5~6.25ul lipofectAMINE試劑。

　　（4）溫和混合兩溶液，室溫放置15~45分鐘以利于DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物的形成，與此同時(shí)，用0.5ml無血清培養(yǎng)基沖洗細(xì)胞一次。

　?。?）混合物中加入0.2ml無血清培養(yǎng)基，溫和混合，加入到漂洗過的細(xì)胞中。

　?。?）37℃二氧化碳溫箱溫育2~24小時(shí)。

　?。?）溫育結(jié)束后，不清除轉(zhuǎn)染混合物直接加入含兩倍濃度血清的培養(yǎng)基。

　?。?）轉(zhuǎn)染18~24小時(shí)后，換以新鮮的*培養(yǎng)基。

　?。?）48小時(shí)后，收獲細(xì)胞或開始篩選。