raw264.7細(xì)胞是一種鼠源的巨噬細(xì)胞系,RAW264.7細(xì)胞貼壁快,形態(tài)以類圓形和不規(guī)則為主,一般1~2個核,少數(shù)有3個核,胞漿伸展時胞體較大。細(xì)胞貼壁緊,胰酶-EDTA難以消化,需要多次消化吹打,也可采用細(xì)胞刮法。
raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)注意事項:
1、具有很強的吞噬能力,當(dāng)吞噬抗原后,細(xì)胞會釋放趨化因子,進一步促進細(xì)胞伸出偽足,增強粘附攀爬能力。細(xì)胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣都會促進該細(xì)胞呈現(xiàn)梭形、長梭形,鏡下會看到具有細(xì)長偽足的小細(xì)胞被類似上皮的梭形大細(xì)胞取代。
2、每次傳代都很難消化下來。用力過大則對細(xì)胞損傷較大,這種細(xì)胞傳代時接種密度要大,否則容易使巨噬細(xì)胞向終末細(xì)胞分化,細(xì)胞變成長形,并且不能回復(fù),這是培養(yǎng)這種細(xì)胞時需要注意的問題。
3、生長時喜歡結(jié)伴。正常生長狀態(tài)應(yīng)該是一小片一小片的生長,片片之間不連接,等到長到更多更密的時候會連成大片,并且會疊加成層。所以,要很好地控制好細(xì)胞的生長速度,不要等到疊加成層的時候再傳代。
4、傳代后貼壁時間較短,半小時就能貼很多,剛貼壁是細(xì)胞呈圓形,折光度很好,鏡下觀察如小珍珠狀一個個地散落于瓶底面。生長一段時間后,部分細(xì)胞會變成類似四角形,伸出偽足之類的。這個時候就是提醒你注意傳代了,這部分細(xì)胞如再不傳代,很容易就老化掉。
raw264.7細(xì)胞破骨細(xì)胞分化:在RANKL的誘導(dǎo)下,RAW264.7細(xì)胞可以分化為成熟的破骨細(xì)胞,此時應(yīng)用破骨細(xì)胞特異性的抗酒石酸酸性磷酸染色(TRAP染色),在有成熟破骨細(xì)胞的部位可見紅色的陽性反應(yīng),所以一般認(rèn)為RAW264.7是一種前破骨細(xì)胞。 向破骨細(xì)胞的分化是一個NF-kb通路依賴的過程,先前的大量研究表明,NF-kb通路受到抑制時,RAW264.7細(xì)胞不能向破骨細(xì)胞的分化。