A549細胞人肺腺癌細胞試劑盒

A549細胞人肺腺癌細胞試劑盒

---尚恩生物 186278592O3---

培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

細胞培養(yǎng)操作

換液周期：2-3天

培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法：

1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；

2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰M，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰M鋪勻瓶底細胞層；

4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；

5.消化到細胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰M消化；

6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；

7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

8.補足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項 不同品牌胰M消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間

消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。

細胞凍存操作

凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手建議);

凍存規(guī)格：200-300萬/ml，1ml每管

凍存方法：

1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；

2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；

3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存

注意事項 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案

細胞培養(yǎng)說明

1. 細胞培養(yǎng)需要充足經(jīng)驗，新手或者沒有類似細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人建議在專業(yè)人士指導下進行操作，尤其注意無菌操作、貼壁細胞消化時間及細胞培養(yǎng)密度。

2. 部分細胞在傳代后時，會有以下現(xiàn)象：細胞內(nèi)會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細胞。以上都是細胞培養(yǎng)常見現(xiàn)象，不影響細胞增殖和實驗。

3. 細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡、細胞器折光或者細胞膜表面物質(zhì)，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，具體情況可以參考ATCC、DSMZ等大型細胞庫細胞照片。細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片，可以吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗；潤洗不能清除的可以消化細胞重新接種，消化完成后加*培養(yǎng)基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

4. 不同品牌胰M溶液成分不一樣，消化活性差別比較大，更換胰M品牌時需重新摸索消化時間，以消化到細胞間隙變大但未漂浮為準，此時結(jié)束消化最佳，避免消化過度導致細胞死亡。細胞消化后比較脆弱，吹打力度不要過大，不要產(chǎn)生過多氣泡，否則會嚴重影響細胞狀態(tài)。

5. 不同細胞生長速度差異較大，所有細胞收貨后第①次傳代建議按1:2傳代。正常培養(yǎng)時生長較慢、密度較低的細胞需要傳代時按1:2傳代，生長較快、密度較高的細胞可以按1:4傳代。

6. 細胞生長偏慢時，可以將血清濃度增加到15-20%培養(yǎng)一段時間，待細胞狀態(tài)和生長速度恢復正常后換回10%血清

關(guān)于售后：

1.所有細胞免費售后期為一周，一周內(nèi)細胞培養(yǎng)出現(xiàn)異常及時拍照反饋。超出一周沒有任何反饋視為細胞培養(yǎng)正常，后期若出現(xiàn)培養(yǎng)問題不再免費重發(fā)。

2. 申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息，若無清晰照片及相應(yīng)信息，不予免費售后；若文件較多不方便在線聯(lián)系或傳送，可以向銷售索要細胞情況表，填寫后反饋給銷售。

3. 售后僅針對由于細胞自身狀態(tài)問題導致不可傳代的情況，若客戶收貨一周內(nèi)已經(jīng)傳代或轉(zhuǎn)移細胞多次，出現(xiàn)死亡或者污染時不予免費售后；若客戶在我方未允許的情況下，擅自遺棄細胞，視為客戶自身問題導致細胞異常，不予免費售后。

4. 細胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導致細胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。

5. 凍存細胞發(fā)貨2管，客戶先復蘇一支，若復蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導下復蘇第二支。若客戶未反饋并復蘇2管失敗，我方將不提供免費售后服務(wù)。凍存細胞售后均發(fā)復蘇培養(yǎng)的，若要重發(fā)凍存細胞，需補加干冰運輸費用。

6. 客戶自行凍存細胞一定要注意凍存后復蘇一管檢查凍存活性，避免凍存死亡導致絕種。我方不對客戶凍存細胞死亡負責，客戶凍存細胞死亡時不予免費售后。

7. 細胞收貨后，請收集發(fā)貨培養(yǎng)基培養(yǎng)至少一瓶細胞，用于確定細胞培養(yǎng)條件及實驗操作是否合適。

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